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抗GFP抗体也识别GFP的变体吗？抗GFP抗体识别维多利亚水母GFP的其他变体。为什么抗GFP抗体在蛋白质印迹上没有信号？Western印迹后缺乏信号可能表明存在一些不同的问题。没有传输或传输非常差意味着没有信号。可能无法通过Ponceau-S染色检查到膜的良好转移。气泡的存在也会导致传输不良。GFP标记蛋白的表达水平可能太低。加载更大体积的样品，并包括阳性对照。稀释度非常高的抗体可能是问题所在，请尝试使用几种不同浓度的抗体来探测蛋白质印迹。另外，极有可能的是GFP标签不合框架且未表达，导致缺少任何信号。GFP信号太弱而无法成像，可以增强信号吗？在某些实验条件下，GFP荧光会部分或完全丢失。因此，某些表达GFP标记蛋白的细胞结构可能难以可视化或成像。GFP-Booster是一种源自Camelid的VHH域结合蛋白，与强荧光染料偶联。这稳定并增强了荧光信号。为什么用抗GFP抗体免疫沉淀后观察到多个条带？抗体交叉反应性是一个常见问题，通常会产生比预期更多的条带。更严格的实验条件可以解决此问题。GFP-Trap可用于免疫沉淀实验。GFP-Trap是具有更高特异性，稳定性和亲和力的单域抗体（源自骆驼科动物）。但是，必须考虑的是，如果生成了截短的融合蛋白，则如果存在标签，抗体也会检测到截短的融合蛋白，并产生多个条带。历史的角度绿色荧光蛋白（GFP）是来自维多利亚水母（Aequorea victoria）的一种小蛋白。它是由下村修（Osamu Shimomura）发现的，并且在蓝色到紫外线范围内的光激发时显示出绿色荧光。在许多其他海洋生物中也发现了相关的荧光蛋白，例如珊瑚，海葵和海紫罗兰。当Martin Chalfie证明GFP基因可以克隆并表达为发光标签时，GFP成为非常流行的工具。从那时起，它已在细菌，酵母，粘液霉菌，蠕虫，果蝇，斑马鱼，哺乳动物细胞系和植物中表达。GFP在其N和C端可耐受多种蛋白质融合，并且不需要任何辅助因子来发出荧光，这使其成为使用最广泛的蛋白质标签之一。这项开创性的工作为研究细胞与发育生物学中的重要问题开辟了新途径。通过许多科学家的努力，尤其是Roger Tsien小组的努力，GFP的调色板已扩展到绿色以外。这允许使用多种变体同时追踪许多生物过程。2008年，Osamu Shimomura，Martin Chalfie和Roger Tsien因其对GFP发光世界的贡献而获得了诺贝尔化学奖。![\"\\\"GFP抗体图2\\\"\"](\"\\\"https://aws.labome.com/figure/te-176-2.png\\\"\")
图2.deGradFP系统（适应于\\\'使用突变体，敲除和转基因研究果蝇的基因功能。WIRES发展生物学，2012，dx.doi.org / 10.1002 / wdev.101）Sicgen GFP的分子结构和显着特征GFP形成非常稳定的桶形结构，由11个围绕中央α螺旋的β折叠组成。Beta表格通过富含脯氨酸的环连接。每张中的氨基酸侧链交替突出到蛋白质内部或从表面向外突出。GFP发色团是通过Ser65，Tyr66和Gly67的分子内环化作用形成的，它几乎位于桶的中心[146]。尽管这三个氨基酸基序在自然界中很常见，但它不会产生荧光。GFPβ-桶的独特内部环境产生了发色团，并保护了它免于猝灭[147]。生色团的形成是自催化的[147]。GFP以主要质子化状态存在，最大激发波长为395 nm，次要的非质子化状态具有475 nm的激发峰[148]。两者的荧光发射在510nm处形成峰。自从GFP在生物科学中流行起来以来，人们一直在努力调整其荧光。水母GFP非常明亮且耐光，但其最大激发波长（395 nm）位于紫外线范围的边界。紫外线在成像时会损坏细胞结构。诱变筛选发现了一个点突变体S65T，其最大激发波长移至488 nm [149]。这种称为\" EGFP”的变体避免了使用紫外线进行激发的问题，并且可以使用常用的异硫氰酸荧光素（FITC）滤光片轻松成像。它也是最亮，最光稳定的GFP。但是，使用GFP的一个重要缺点是其光谱行为会受到pH值的影响。GFP荧光指向内室或溶酶体等酸性区室时会被淬灭。当用413纳米的光强照射（或通过双光子激发）后，用488纳米的光激发时，可光活化变体（PA-GFP）将荧光增加100倍，并且在好氧条件下，荧光保持稳定数天[150]。![](\"\\\"https://www.ebiomall.com/data/catflashimg/10.png\\\"\")
Sicgen部分产品如下：
货号 | 产品名称 |
AB0162-100 | anti-INSR |
AB10089-200 | Anti-ATXN3 |
AB10089-500 | Anti-ATXN3 |
AB0106-100 | anti-ERBB1 |
AB0173-100 | anti-IL10 |
AB0113-100 | anti-VSV-G tag |
AB0165-100 | Anti-GFAP |
AB252253-100 | Anti-Vimentin |
AB240241-100 | Anti-CD2 |
AB0242-100 | Anti-Rab38 |
AB0056-200 | Anti-Rab9a |
AB0126-100 | Anti-T7 tag |
AB0093-100 | Anti-LMNA |
AB0017-100 | Anti-Rab1b |
AB0018-100 | Anti-Rab1b |
AB0287-100 | Anti-SNCG |
AB0123-500 | Anti-REP1 |
AB0283-100 | Anti-STUB1 |
AB0291-100 | Anti-Nucleolin |
AB9770-100 | Anti-mCherry |
AB0132-100 | Anti-REP2 |
AB0277-100 | Anti-NPY1R |
AB1011-1000 | Goat IgG Protein |
苏州蚂蚁淘生物科技有限公司是一家依托于中科院生命科学领域的高新技术生物公司，致力于生命科学领域产品的研发与销售，蚂蚁淘生物秉承为客户提供高质量产品及优质服务的理念，从事科研机构及生产企业所需的各种品牌生化剂、抗体、血清、ELISA试剂盒、移液枪、中小型仪器设备、耗材等专业进出口公司。主要经营品牌abcam、abnova、peprotech、RD、CST、AbD Serotec、Athens Research Technology、Chemicon 、Evrogen、 Bio-Rad、 Zymed、wako、bachem、Exiqon、Invitrogen、Eppendorf、Bioassay、cayman、TRC、Omega、Promega、Axygen、AssayPro等品牌中国区域.代理商,自成立以来发展迅速，产品服务得到全国广大生产企业、高校、科研院所、医疗系统及相关试剂公司的肯定，我们愿竭尽所能，赛因百奥生物在保证产品质量的基础上将以超低价格为您提供优质服务；同时也为广大经销公司提供充足货源，我们的目标是努力成为国内生物学产品行业专业供应商。
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